طراحی و ساخت ناقل ‌بیانی ژن فعال‌کننده پلاسمینوژن بافتی انسانی برای قارچ دکمه‌ای سفید Agaricus bisporus

نوع مقاله: علمی - پژوهشی

نویسندگان

1 دانشجوی دکترای بیوتکنولوژی کشاورزی، گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، زنجان

2 استاد گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهان زراعی، دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد

3 استادیار گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهان زراعی، دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد

4 دانش‌آموخته کارشناسی‌ارشد گروه بیوتکنولوژی و به نژادی گیاهان زراعی، دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد

چکیده

سیستم گلیکوزیلاسیون قارچ دکمه‌ای سفید مشابهت زیادی با سلول‌های پستانداران دارد و سبب شده است تا این قارچ برای بیان پروتئین‌های نوترکیب گلیکوزیله، از جایگاه قابل‌توجهی برخوردار گردد. فعال‌کننده پلاسمینوژن بافتی انسانی یک پلی‌پپتید تک‌زنجیره‌ای گلیکوزیله است که سبب از بین رفتن لخته‌های خونی می‌شود. راه‌انداز gpdII نژادهای IM008 و Holland737 قارچ دکمه‌ای سفید با استفاده از واکنش زنجیره‌ای پلی­مراز تکثیر و با قرار گرفتن راه‌انداز gpdII نژاد IM008 پیش از ژن گزینشگر hph پلاسمید pCAMBIA1304، سازه pCAMBIAH8 ساخته شد. با انتقال قطعات gLI7 و gLI8 (به­ترتیب حاصل اتصال راه‌انداز gpdII نژادهای Holland737 و IM008 به اینترون شماره هفت ژن gpdII و توالی ترشحی ژن لاکاز 1 می‌باشند) به سازه pCAMBIAH8، سازه‌های بیانی p13H87 و p13H88 طراحی و ساخته شدند. سرانجام با ورود ژن tPA به سازه‌های p13H88 و p13H87، سازه‌های بیانی p13H88T و p13H87T ایجاد شدند. سازه‌های ایجاد شده را می‌توان برای تولید tPA و همچنین برنامه‌های بهبود نژادی قارچ دکمه‌ای سفید مورد استفاده قرار داد.

کلیدواژه‌ها


عنوان مقاله [English]

Design and Construction of Human Tissue Plasminogen Activator Expression Vector for The White Button Mushroom, Agaricus bisporus

نویسندگان [English]

  • Mohsen Ashrafi 1
  • Mohammad Farsi 2
  • Amin Mirshamsi kakhki 3
  • Mozhgan Parvandi 4
1 PhD Student of Agricultural Biotechnology, Department of Biotechnology, Faculty of Agriculture, University of Zanjan
2 Professor, Department of Agricultural Biotechnology and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad
3 Assistant Professor, Department of Agricultural Biotechnology and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad
4 Graduate Student of Agricultural Biotechnology, Department of Agricultural Biotechnology and Plant Breeding, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad
چکیده [English]

The similarity of the white button mushroom glycosylation to mammalian cells, caused a significant position to expression of recombinant glycosylated proteins in this mushroom. Human t-PA is a glycosylated protein that degrades the fibrin network formed within blood clots. The gpdII promoter of the button white mushroom strains IM008 and Holland737 were isolated via PCR and the gpdII promoter of the strain IM008 inserted before of hph gene in pCAMBIA1304 plasmid and pCAMBIAH8 constructed. The gLI7 and gLI8 fragments (resulted from connectivity of gpdII promoter of strains Holland737 and IM008, respectively to intron number seven of gpdII gene and laccase1 gene signal peptide) inserted to pCAMBIAH8 and then p13H88 and p13H87 created. Finally the tPA gene cloned to pCAMBIAH88 and pCAMBIAH87 and then p13H88T and p13H87T constructed, respectively. Constructs in this research can be used for tPA production as well as for genetic improvement program of the white button mushroom.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Intron
  • Recombinant protein
  • Signal peptide
  • gpdII promoter
  • The button white mushroom
Berg, D. T. and Grinnell, B. W. 1991. Signal and propeptide processing of human tissue plasminogen activator: Activity of a pro-t-PA derivative. Biochemical and Biophysical Research Communications, 179: 1289-1296.

Burns, C., Leach, K. M., Elliott, M. P., Foster, G. D. and Bailey, A. 2006. Evaluation of Agrobacterium-mediated transformation of Agaricus bisporus using a range of promoters linked to Hygromycin resistance. Molecular Biotechnology, 32: 129-138.

Chelvar-froosh, N. 2012. Optimization of hph gene transfer to Agaricus bisporus through Agrobacterium tumefaciens. MSc Thesis. Ferdowsi University of Mashhad, 100 pp.

Chen, X., Stone, M., Schanghaufer, C. and Romaine, P. 2000. A fruiting body tissue method for efficient Agrobacterium-mediated transformation of Agaricus bisporus. Applied and Environmental Microbiology, 66: 4510- 4513.

Datar, R. V., Cartwright, T. and Rosen, C. G. 1993. Process economics of animal cell and bacterial fermentations: a case study analysis of tissue plasminogen activator. Nature Biotechnology, 11: 349-357.

Farsi, M. and Poorianfar, H. R. 2011. Cultivation and breeding of the white bottom mushroom. 2nd Edition. Jahhad Daneshgahi Mashhad Publisher, Iran, 168 pp.

Griffiths, J. and Electricwala, B. A. 1987. Production of tissue plasminogen activators from animal cells. Advances in Biochemical Engineering Biotechnology, 34: 147-166.

Horgen, P. A. and Castle, A. 2002. The application and potential of molecular approaches to mushrooms. Agricultural applications. The Mycota, 11: 2-17.

Jarvis, D. L. and Summers, M. D. 1989. Glycosylation and secretion of human tissue plasminogen activator in recombinant baculovirus-infected insect cells. Molecular and Cellular Biology, 9: 214-223.

Kaleri, H. A., Xiang, L., Aniwashi, J. and Xu, S. 2011. Oviduct-specific expression of tissue plasminogen activator in laying hens. Genetics and Molecular Biology, 34: 231-236.

Kang, S., Ajjappala, H., Hui-Seo, H., Soo-Sim, J., Hong-Yoong, S., Sung-Koo, B., Hwan-Kim, Y., Lee, S. and Soo-Hahn, B. 2011. Expression of the human tissue-plasminogen activator in hairy roots of oriental melon (Cucumis melo). Plant Molecular Biology Reporter, 29: 919-926.

Lessard, P. A., Kulaveerasingam, H., York, G. M., Strong, A. and Sinskey, A. J. 2000. Manipulating gene expression for the metabolic engineering of plants. Metabolic Engineering, 4: 67-79.

Masoumiasl, A., Jalali-Javaran, M., Mahboudi, F. and Alizadeh, H. 2010. Cloning and expression of tissue plasminogen activator (t-PA) gene in tobacco plants. Scientific Research and Essays, 5: 917-922.

Rose, A. B. 2008. Intron-mediated regulation of gene expression. Current Topics in Microbiology and Immunology, 326: 277-290.

Rouf, S. A., Moo-Young, M. and Chisti, Y. 1996. Tissue-type plasminogen activator: characteristics, application and production technology. Biotechnology Advances, 14: 239-266.

Sambrook, J. and Russell, D. W. 2001. Molecular Cloning, A Laboratory Manual. 3nd Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.

Soleimani, M., Ddavoudi, N., Fallahian, F. and Mahboudi, F. 2006. Cloning of tissue plasminogen activator cDNA in nonpathogenic Leishmania. Cell Journal (Yakhteh), 8: 196-203.

Stern, B., Olsen, L. C., Tröße, C., Ravneberg, H. and Pryme, I. F. 2007. Improving mammalian cell factories: The selection of signal peptide has a major impact on recombinant protein synthesis and secretion in mammalian cells. Trends in Cell and Molecular Biology, 2: 1-17.

Saunders, G., Picknett, T. M., Tuite, M. F. and Ward, M. 1989. Heterologous gene expression in filamentous fungi. TRENDS in Biotechnology, 7: 283-287.

Upshall, A., Kumar, A., Bailey, M. C., Parker, M. D., Favreau, M. A., Lewison, K. P., Joseph, M. L., Maraganore, J. M., and McKnight, G. L. 1987. Secretion of active human tissue plasminogen activator from the filamentous fungus Aspergillus nidulans. Nature Biotechnology, 5: 1301-1304.

Wen, B., Deng, Y., Guan, J., Yan, W., Wang, Y., Tan, W. and Gao, J. 2011. Signal peptide replacements enhance expression and secretion of hepatitis C virus envelope glycoproteins. Acta Biochimica et Biophysica Sinica, 43: 96-102.

Wiebe, M. G., Karandikar, A., Robson, G. D., Trinci, A. P. J., Candia, J. L. F., Trappe, S., Wallis, G., Rinas, U., Derkx, P. M. F. and Madrid, S. M. 2001. Production of tissue plasminogen activator (t‐PA) in Aspergillus niger. Biotechnology and Bioengineering, 76: 164-174.